分享到：
关于征求保健食品中大蒜素的测定等15个保健食品
返回上一级
附件：
一、保健食品中大蒜素的测定
1 范围
本方法适用于以大蒜及其制品为原料的保健食品中大蒜素（三硫二丙烯，C6H10S3）的含量测定。
本方法最低检出浓度为0.0430mg/mL；取100mg试样，提取定容5.0mL时，试样中大蒜素最低检出质量浓度为0.20g/100g。
本方法最佳线性范围： 0.320mg/mL～3.00 mg/mL。
2 原理：根据大蒜素为挥发性油成分，经有机溶剂提取，用气相色谱仪分析，采用外标法定量。
3 试剂
除特殊说明，所用试剂均为分析纯。
3.1 无水乙醇
3.2 正己烷
3.3 标准溶液：称取0.1000g标准品，置于10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，该溶液中含大蒜素浓度为10.0mg/mL。此溶液可在冰箱中保存七天。取该溶液1.0mL，置于10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，此溶液含大蒜素浓度为1.0mg/mL。
4 仪器
4.1 气相色谱仪：附氢火焰（FID）检测器
4.2 数据处理机或积分仪
4.3 分析天平：万分之一
4.4 超声清洗机
4.5 离心机：3000r/min
5 分析方法
5.1 试样提取
5.1.1 固体试样：称取试样适量（相当于含大蒜素5mg，精确至0.001g），加无水乙醇适量，密塞，超声70min，取出冷却，加正己烷定容（调节大蒜素含量约为1mg/mL），振摇，静置分层后，取上层溶液进样。
5.1.2 液体试样 吸取试样适量（相当于含大蒜素5mg，精确至0.001g），置于分液漏斗中，加5mL正己烷振摇提取1min，静置（或离心）分层后，取上层溶液进样。
5.2 气相色谱参考条件
5.2.1 色谱柱：HP-5(30m×0.25mm)
5.2.2 柱箱温度：100℃（3min）
5.2.3 进样口温度：220℃
5.2.4 检测器温度：250℃
5.2.5 载气：氮气（1mL/min）
5.2.6 氢气：40mL/min；空气：400mL/min
5.2.7 进样量：1μL
5.3 定性分析：在参考操作条件下，以对照品与试样比较保留时间定性。
5.4 定量分析：试样中大蒜素色谱峰面积或峰高与标准的色谱峰面积或峰高比较定量。
5.5 结果计算
W =
×100
式中：
W—大蒜素的含量，g/100g（g/100mL）；
A1—试样使用液色谱峰面积或峰高；
A2—标准使用液峰面积或峰高；
C—标准使用液浓度，mg/mL；
V—试样定容体积，mL；
m—试样量，g（mL）。
计算结果保留三位有效数字。
二、保健食品中芦荟苷的测定
1 范围
本方法适用于以芦荟及其制品为原料的保健食品中芦荟苷含量的测定。
本方法的最低检出量10ng。
本方法的最佳线性范围：0～100μg/mL
2 原理：用甲醇+水（55+45）作为溶剂，提取试样中的芦荟苷，经高效液相色谱仪C18 柱分离，在紫外293nm 波长下检测，以芦荟苷保留时间定性，峰面积定量。
3 试剂
除特殊说明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682-2008一级水要求。
3.1 甲醇：色谱纯
3.2 芦荟苷标准品：纯度≥98%
3.3 芦荟苷标准溶液：精确称取芦荟苷标准品10.0mg，加流动相甲醇+水（55+45）溶解并移入100mL容量瓶中，定容至刻度。精密移取5mL至10mL容量瓶中，加流动相定容至刻度。
4 仪器设备
4.1 高效液相色谱仪：附二极管阵列或紫外检测器
4.2 色谱柱：C18（以十八烷基键合硅胶填料为填充剂）或具同等性能的色谱柱，150mm×6mm，5μm。
4.3 超声波清洗器
4.4 C18净化富集柱C18预柱装量0.5g：分配型
4.5 离心机：3000r/min
5 色谱参考条件
5.1 流动相：甲醇+水=55+45
5.2 流速：1mL/min
5.3 柱温：40℃
5.4 检测波长：293nm
5.5 灵敏度：0.016AUFS
5.6 进样量：10μL
6 分析步骤
6.1 试样制备：将固体试样粉碎成粉末状，混匀，称取适量试样（相当于含芦荟苷2.5mg，精确至0.001g）于50mL容量瓶中，加检测用流动相30mL，混匀，经超声振提5min，加流动相定容50mL，离心沉淀，上清液经滤膜（0.45μm）过滤，芦荟汁饮料直接经0.45μm 滤膜过滤。
6.2 测定步骤：分别精密吸取标准溶液和试样溶液10μL 注入高效液相色谱仪，依上述色谱条件，以保留时间定性，用外标法计算试样中芦荟苷的含量。
7 结果计算
X =
式中：
X—试样中芦荟苷含量，mg/g（mg/mL）；
A1—试样中芦荟苷的峰面积或峰高；
C—标准液的质量浓度，mg/mL；
A2—标准液中芦荟苷的峰面积或峰高；
V—试样定容体积，mL；
m—试样的质量，g（mL）。
计算结果保留三位有效数字。
三、保健食品中红景天苷的测定
1 范围
本方法适用于以红景天为原料的保健食品中红景天苷的测定。
本方法的检出限：0.5mg/mL。
本方法的线性范围：0.01～0.50mg/mL。
2 原理：混匀的保健食品试样经70%乙醇超声波提取，聚酰胺柱净化后，以0.01mol/L NH4Ac-甲醇为流动相（80：20），采用高效液相色谱法，紫外检测器，根据保留时间定性，标准曲线法定量检测。
3 试剂
试验用水为重蒸水。
3.1 乙酸铵：分析纯
3.2 甲醇：色谱纯
3.3 乙醇：分析纯
3.4 柱层析用聚酰胺粉（粒度：30～60目）
3.5 红景天苷标准溶液 准确称量红景天苷标准品0.0200g，加入甲醇溶解并定容至10mL。此溶液每毫升含2.0mg红景天苷。
4 仪器
4.1 高效液相色谱仪： 附紫外检测器（UV）
4.2 超声波清洗器
4.3 离心机
4.4 聚酰胺净化柱：用5mL玻璃注射器（长75mm，内径为12mm） 作层析柱，底部放少许脱脂棉，内装层析用聚酰胺粉 1.0g。
5 分析步骤
5.1 试样处理
5.1.1 固体样品：取20粒以上片剂或胶囊试样进行粉碎、混匀，准确称取适量试样（精确至0.001g），用70％乙醇超声波萃取30min，定容至25mL。混匀，静置后，取10.00mL上清液于蒸发皿中，于沸水浴上挥干溶剂，用3mL水（分3～4次）溶解残渣并转移至聚酰胺柱上，待过柱后再用10mL水分数次洗脱柱中吸附的红景天苷，控制洗脱液流速为0.5～0.8mL/min，收集所有的洗脱液，定容至10.00mL，混匀后经0.45μm滤膜过滤，供液相色谱分析用。
5.1.2 液体样品：根据样品中红景天苷的含量，准确吸取一定量摇匀后的试样（1～10mL）于蒸发皿中去除溶剂（若试样中不含乙醇，则可直接过聚酰胺柱），其余步骤同上。
5.2 色谱参考条件
5.2.1 色谱柱：C18柱，4.6×250mm,5μm。
5.2.2 柱温：25℃
5.2.3 检测波长：215nm
5.2.4 流动相：甲醇-0.01mol/L乙酸铵溶液＝20:80
5.2.5 流速：1.0mL/min
5.2.6 进样量：10mL
5.3 标准曲线制备：分别配制浓度为0.0、0.01、0.02、0.05、0.20、0.50 mg/mL红景天苷标准溶液,在给定的仪器条件下进行液相色谱分析,以红景天苷的浓度为横坐标，相应的色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线或进行线性回归。
6 测定：取10μL标准溶液及试样溶液注入色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰面积与标准系列比较定量。
7 结果计算
Ｃ×Ｖ
X = —————
m×1000
式中：
X—试样中红景天苷的含量，mg/g（mg/mL）；
C—由标准曲线上查出待测样液中红景天苷的浓度（mg/mL）；
V—样品的定容体积，mL；
m—样品量，g（mL）。
计算结果保留2位有效数字。
四、保健食品中肉碱的测定
1 范围
本方法适用于以肉碱为主要原料的保健食品中肉碱的测定。
本方法最低检出量为0.27μg。
本方法最佳线性范围：0.050mg/mL～2.0mg/mL。
2 原理：试样中的肉碱以0.5mmol/L的盐酸超声提取，反相色谱分离，与标准品的保留时间比较定性，以峰面积外标法定量。
3 试剂
除特殊说明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682-2008一级水要求。
3.1 磷酸氢二钾
3.2 辛烷磺酸钠
3.3 0.50mmol/L盐酸
3.4 肉碱标准溶液：精密称取干燥至恒重的肉碱标准品（含量98%）0.0200g，用0.50mmol/L盐酸溶解并定容为10.0mL，此溶液浓度为2.0mg/mL。
4 仪器
4.1 高效液相色谱仪：配有二极管阵列或紫外检测器和色谱工作站或记录仪
4.2 超声波提取器
4.3 溶剂微孔过滤器：带0.45μm 水相滤膜。
5 分析步骤
5.1 试样预处理：称取粉碎并混合均匀的试样适量（相当于含肉碱约40mg，精确至0.001g），液体试样取5.0mL，于50mL容量瓶中，加入0.50mmol/L 盐酸约35mL，超声提取10min，用0.50mmol/L 盐酸定容，混匀，过滤，弃初滤液数毫升，收集滤液，过0.45μm 水相滤膜，为试样处理液。供HPLC分析。
5.2 试样分析
5.2.1 色谱参考条件：Shim-pakCLC ODS柱，4.6×200mm，10μm。
5.2.2 流动相：水相[0.05mol/L（8.7g） 磷酸氢二钾溶液，0.002mol/L（0.4325g）辛烷磺酸钠，用磷酸调至pH2.5]-乙腈=90:10
5.2.3 流速：0.8mL/min
5.2.4 检测波长：210nm
5.3 标准曲线的制备：分别取标准溶液0.0、0.25、0.50、1.0、2.0、2.5、5.0mL标准溶液（3.4）于5mL容量瓶中，用0.50mmol/L盐酸稀释并定容为5.0mL，分别进样20mL进行色谱分析。用标准浓度—峰面积绘制标准曲线。
5.4 试样测定：取20mL试样处理液（5.1）注入色谱仪中，以保留时间定性，面积定量。
5.5 结果计算
C×V
X = ———
m
式中：
X—为试样中肉碱的含量，mg/g；
m—为试样质量，g；
C—为试样处理液中肉碱的浓度，mg/mL；
V—为试样处理液体积，mL。
结果保留三位有效数字。
五、保健食品中人参皂苷的高效液相色谱测定
1 适用范围
本方法适用于以人参为主要原料的保健食品中人参皂苷含量的测定。
本方法的六种皂苷的最低检出量为 10mg/kg。
本方法的六种皂苷的最佳线性范围：0.1mg/mL～1mg/mL。
2 原理：将试样中的人参皂苷溶解、提取，经净化处理后，使用梯度洗脱反相高效液相色谱进行分离，紫外检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量，适用于保健食品中人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd的同时定量分析。
3 试剂
除特殊说明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682-2008一级水要求。
3.1 乙腈：色谱纯，200nm吸光度值为0.021
3.2 甲醇
3.3 D101大孔吸附树脂
3.4 高效液相色谱流动相：梯度淋洗A液为乙腈，B液为水。
3.5 人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd标准品：含量大于98%（HPLC）
3.6 人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd标准溶液的配制：配制人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd标准储备液，浓度分别为10mg/mL；再以此储备液配制成混合标准系列溶液，浓度范围为0.1mg/mL～1mg/mL；所有标准溶液均用甲醇配制。
4 仪器设备
4.1 高效液相色谱仪：附二极管阵列或紫外检测器
4.2 超声波清洗器
4.3 离心机
4.4 水浴锅
5 分析步骤
5.1 固体试样处理：取试验研成粉末，并过20目筛。称取该粉末样适量（相当于含总人参皂苷约75mg，精确至0.001g），于50mL具塞试管中，加水50mL于超声波清洗器中超声提取30分钟，取出，待溶液恢复常温后，准确取出10mL，通过D101大孔吸附树脂净化柱（大孔吸附树脂使用前先经甲醇浸泡，水洗，装成10cm长小柱），小柱先用10mL水冲洗，弃去水液之后，用70%甲醇25mL洗脱皂苷，收集甲醇溶液，水浴上蒸干，残渣以甲醇溶解并定容至5mL，该样液离心后过0.5μm膜，滤液进行色谱分析。
5.2 液体试样处理：取一定量的试样于水浴上蒸干，残渣以50mL水超声提取30分钟，余下步骤与5.1相同。
5.3 测定
5.3.1 液相色谱参考条件
5.3.1.1 色谱柱：反相C18柱，4.6×250mm，5μm
5.3.1.2 检测波长：203nm
5.3.1.3 梯度淋洗条件
5.3.1.4 柱温：35℃
5.3.2 色谱分析
5.3.2.1 标准曲线的制备：将混合标准系列溶液均取5μL进HPLC分析，用峰面积对浓度作各皂苷的标准回归曲线。
5.3.2.2 试样测定：取5μL试样净化液进高效液相色谱分析，以绝对保留时间定性，用峰面积通过各皂苷的标准曲线定量，计算试样中人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd的含量。
6 结果计算
Ｃ×5×5×100
试样中各人参皂苷的含量（g/100g）= ———————
m×1000
式中：
C—试样溶液中各人参皂苷的含量，mg/mL；
m—试样量，g（mL）。
试样中总人参皂苷的含量= CRe＋CRg1＋CRb1＋CRc＋CRb2＋CRd
式中：
CRe—试样中Re的含量，g/100g（g/100mL）；
CRg1—试样中Rg1的含量，g/100g（g/100mL）；
CRb1—试样中Rb1的含量，g/100g（g/100mL）；
CRc—试样中Rc的含量，g/100g（g/100mL）；
CRb2—试样中Rb2的含量，g/100g（g/100mL）；
CRd—试样中Rd的含量，g/100g（g/100mL）。
计算结果保留三位有效数字
六、保健食品中核苷酸的测定
1 范围
本方法规定了保健食品中核苷酸的高效液相色谱测定方法。
本方法检出限：胞嘧啶核苷（CMP）0.04μg/mL、脲嘧啶核苷（UMP）0.05μg/mL、腺嘌呤核苷（AMP）0.05μg/mL、鸟嘌呤核苷（GMP）0.06μg/mL。
本方法线性范围：胞嘧啶核苷（CMP）0.992～12.4μg/mL、脲嘧啶核苷（UMP）1.17～14.6μg/mL、腺嘌呤核苷（AMP）1.01～12.6μg/mL、鸟嘌呤核苷（GMP）0.948～12.3μg/mL。
2 原理：将试样溶解、去除蛋白后， 使用氨基固相萃取柱对核苷酸进行净化富集，根据高效液相色谱紫外检测器在254nm处的响应进行定性定量。
3 试剂
除特殊说明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682-2008一级水要求。
3.1 甲醇：优级纯
3.2 乙酸
3.3 磷酸二氢钾
3.4 磷酸氢二钾
3.5 季铵盐固相萃取柱
3.6 核苷酸标准储备溶液：准确称量经100℃干燥4h处理的标准品胞嘧啶核苷（CMP）100mg，脲嘧啶核苷（UMP）、腺嘌呤核苷（AMP）、鸟嘌呤核苷（GMP）各40mg，加水定容至100mL。
3.7 核苷酸标准使用液： 将核苷酸标准储备溶液用0.25mol/L，pH=3的磷酸二氢钾稀释100倍。
4 仪器设备：高效液相色谱仪（附二极管阵列或紫外检测器）
5 分析步骤
5.1 试样处理
5.1.1 称取试样适量（相当于含核苷酸约6.5mg，精确至0.001g），于100mL容量瓶中，加入约50℃热水80mL，彻底混匀。当试样液达到室温后用水定容至刻度。
5.1.2 准确吸取10mL试样溶液至100mL容量瓶中，加入0.5％乙酸5mL、水10mL，混匀后静置5min以沉淀蛋白。用水定容至刻度，混匀后过滤，弃去数毫升初滤液后收集约30mL滤液。
5.1.3 将季铵盐固相萃取柱先用10mL甲醇、10mL水活化后，再将20mL试样滤液过滤，以1mL水清洗萃取柱，用0.25mol/L，pH=3.5磷酸二氢钾溶液洗脱出5mL滤液。全部过程需要控制流速1滴/秒。
5.2 液相色谱参考条件
5.2.1 色谱柱：C18 柱 3.9×150mm
5.2.2 柱温：25℃
5.2.3 检测波长：254nm
5.2.4 流动相：0.01mol/L磷酸二氢钾-0.1mol/L磷酸氢二钾=480:20
5.2.5 流速：0.6mL/min
5.2.6 进样量：10μL
5.2.7 色谱分析：量取10μL标准溶液及试样溶液注入色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。
5.3 标准曲线的制备：分别配制浓度为1.0、2.0、5.0、10.0、16.0μg/mL的4种核苷酸标准溶液，在给定的仪器条件下进行液相色谱分析，以峰高或峰面积对浓度作标准曲线。
6 结果计算
h1×C×K×5×100
X = ————————
h2×m×1000
式中：
X—试样中核苷酸的含量，mg/100g；
h1—试样峰高或峰面积；
C—标准溶液浓度，μg/mL；
K—稀释倍数；
h2—标准溶液峰高或峰面积；
m—试样量，g。
试样中总核苷酸的含量为胞嘧啶核苷（CMP）、脲嘧啶核苷（UMP）、腺嘌呤核苷（AMP）、鸟嘌呤核苷（GMP）含量之和。
检测结果保留三位有效数字。
七、保健食品中洛伐他汀含量测定
1 范围
本方法适用于以红曲为原料的保健食品中洛伐他汀含量的测定。
本方法的最低检出量2.0mg/kg。
本方法的最佳线性范围2.00～300μg/mL。
2 原理：将酸性介质中的试样使用三氯甲烷进行提取，挥干提取溶剂，以流动相定容，根据高效液相色谱紫外检测器在238nm处的响应进行定性定量。
3 试剂
除特殊说明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682-2008一级水要求。
3.1 甲醇：色谱纯
3.2 三氯甲烷
3.3 磷酸
3.4 洛伐他汀标准储备液：准确称量洛伐他汀标准品0.0400g，加入检测用流动相并定容至100mL。此溶液每毫升含0.4mg洛伐他汀。
3.5 洛伐他汀标准使用液：将洛伐他汀标准储备液用流动相稀释10倍。此溶液每毫升含40μg洛伐他汀。
4 仪器设备
4.1 高效液相色谱仪：附二极管阵列或紫外检测器（UV）
4.2 超声波清洗器
4.3 涡旋混匀器
4.4 离心机
4.4 真空泵
5 分析步骤
5.1 试样处理
5.1.1 将片剂、胶囊或红曲发酵产物试样粉碎并混合均匀，称取试样适量（相当于含洛伐他汀约10mg，精确至0.001g），于50mL试管中，加入10.0mLpH=3 磷酸水溶液。超声提取10min后再加入10.0mL三氯甲烷，置于涡旋混匀器3min。静置后去掉上层水相，将三氯甲烷层以3000r/min，离心3min。
5.1.2 准确吸取上清液1.0mL至5mL试管中，将试管置于50℃左右水浴中使用真空泵减压干燥至挥去全部溶剂。
5.1.3 向试管中加入流动相并定容至5.0mL，彻底混匀，经0.45μm 滤膜过滤后待进样。
5.2 液相色谱参考条件
5.2.1 色谱柱：C18柱，4.6×250mm。
5.2.2 柱温：室温
5.2.3 检测波长：238nm
5.2.4 流动相：甲醇-水-磷酸=385:115:0.14
5.2.5 流速：1.0mL/min
5.2.6 进样量：10μL
5.2.7 色谱分析：量取10μL标准溶液系列及试样溶液注入色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。
5.3 标准曲线制备：配制浓度为2.0、10、50、100、300μg/mL洛伐他汀标准溶液，在给定的仪器条件下进行液相色谱分析，以峰高或峰面积对浓度作标准曲线。
5.4 结果计算
X =
式中：
X—试样中洛伐他汀的含量，g/100g；
h1—试样峰高或峰面积；
c—标准溶液浓度，mg/mL；
50—试样稀释倍数；
h2—标准溶液峰高或峰面积；
m—试样量，g。
检测结果保留三位有效数字。
八、保健食品中槲皮素、山柰素、异鼠李素的高效液相色谱测定
1 范围
本方法适用于以银杏叶或银杏叶提取物为主要原料的保健食品中槲皮素、山柰素、异鼠李素含量的测定。
本方法的检测限分别为：槲皮素0.002μg、山柰素0.003μg、异鼠李素0.005μg。
本方法的最佳线性范围为10μg/mL～100μg/mL。
2 原理：试样经提取、水解等前处理后，使用等度洗脱反相高效液相色谱进行分离，紫外检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量，测定试样中苷元槲皮素、山柰素、异鼠李素含量。
3 试剂
除特殊说明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682-2008一级水要求。
3.1 甲醇：色谱纯
3.2 高效液相色谱流动相：甲醇-水=50:50（以磷酸调节pH=2.5）
3.3 槲皮素、山柰素、异鼠李素标准品：含量大于98％（HPLC）
3.4 槲皮素、山柰素、异鼠李素标准溶液：分别准确称取100mg槲皮素、山柰素、异鼠李素标准品于100mL 容量瓶中，加入甲醇溶解后，定容至刻度，此溶液浓度为1.0mg/mL，将该液稀释成10～100μg/L的标准系列溶液。
4 仪器设备
4.1 高效液相色谱仪：附二极管阵列或紫外检测器
4.2 水浴锅
4.3 超声波清洗器
4.4 离心机
5 分析步骤
5.1 试样处理：取试样适量（相当于含总黄酮约3mg，精确至0.001g），用20mL甲醇于超声波浴中提取30分钟，过滤后滤液加入20mL 1.5mol/L盐酸于水浴上回流水解3小时，冷却后用甲醇定容至50mL，该样液过0.5μm膜，滤液进HPLC分析。
5.2 测定
5.2.1 液相色谱参考条件
5.2.1.1 色谱柱：反相C18 柱，5μm，100Å，3.9mm ID×150mm
5.2.1.2 检测波长：360nm
5.2.1.3 流速：1.0mL/min
5.2.1.4 柱温：室温
5.3.1 色谱分析：取10μL标准溶液及试样提取液进高效液相色谱分析，以保留时间定性，用峰面积以外标法定量计算试样中槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量。
6 结果计算
X% = Q% + K% + I%
式中：
X%—试样中槲皮素、山柰素、异鼠李素的总含量；
Q%—试样中槲皮素含量；
K%—试样中山柰素含量；
I%—试样中异鼠李素含量。
样品中银杏叶总黄酮苷的含量（%）= X%×2.51
7 结果表示：分析结果保留三位有效数字。
九、保健食品中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的测定
1 范围
本方法适用于保健食品中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的含量测定。
本方法最低检出量：异麦芽糖2μg；潘糖5μg；异麦芽三糖10μg；蔗果三糖（GF2）5μg蔗果四糖（GF3）5μg；蔗果五糖（GF4）10μg；棉籽糖20μg；水苏糖30μg。
2 原理：试样除去蛋白后，离心、脱色，用液相色谱分析，用NH2 柱分离，示差检测器测定，外标法定量。
3 试剂
除特殊说明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682-2008一级水要求。
3.1 乙腈：色谱纯
3.2 无水乙醇
3.3 麦芽糖、异麦芽糖、潘糖、麦芽三糖、异麦芽三糖、棉籽糖、水苏糖（含量≥98%）
3.4 低聚果糖（总含量≥96%，其中GF2 38%，GF3 51%，GF4 7%）
3.5 麦芽糖、异麦芽糖混合标准溶液：分别称取麦芽糖10.0mg，异麦芽糖15.0mg，潘糖9.0mg，麦芽三糖15.0mg，异麦芽三糖12.0mg，用水溶解并定容至1.0mL。将此溶液逐级稀释成下列浓度：
标准溶液名称：麦芽糖、异麦芽糖、潘糖、麦芽三糖、异麦芽三糖 （mg/mL）
1 0.50 0.75 0.45 0.75 0.60
2 1.00 1.50 0.90 1.50 1.20
3 2.00 3.00 1.80 3.00 2.40
4 10.00 15.00 9.00 15.00 12.00
3.6 低聚果糖标准溶液：精密称取含 GF2 38%、GF3 51%、GF4 7%的低聚果糖标准品0.0500g，用水溶解并定容至2.50mL。将此液逐级稀释成下列浓度：
标准溶液名称： GF2、 GF3、 GF4（mg/mL）
1 1.50 2.00 0.30
2 3.00 4.00 0.60
3 4.50 6.00 0.90
4 6.00 8.00 1.20
5 7.50 10.00 1.40
3.7 棉籽糖、水苏糖标准溶液：精密称取棉籽糖0.0400g、水苏糖0.0600g，用水溶解并定容至4.0mL。将此液逐级稀释成下列浓度：
标准溶液名称： 棉籽糖 水苏糖（mg/mL）
1 2.0 3.0
2 4.0 6.0
3 6.0 9.0
4 8.0 12.0
5 10.0 15.0
由于试样中程度不同的含有葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖，所以在配制标准应用液时可加入适量的葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖，主要是用于定性。
将各标准系列注入高效液相色谱仪进行测定，绘制标准工作曲线。
4 仪器
4.1 高效液相色谱仪（附带示差检测器）
4.2 离心机：10000r/min
4.3 分析天平：1/10000
4.4 分析天平：1/1000
5 分析步骤
5.1 试样制备
5.1.1 糖浆和糖粉：称取1.0000g糖浆或0.2000g糖粉，用水稀释或溶解，并定容置10.0mL，摇匀，溶液过0.45μm 滤膜，滤液用于HPLC测定。
5.1.2 不含乳液体饮料：饮料直接离心，上清液过0.45μm 滤膜，滤液用于HPLC测定。
5.1.3 含乳液体饮料: 取10.0mL 试样放入烧杯中，加无水乙醇30mL，搅拌混匀，放置5min，离心，取上清液20 mL 在沸水浴上挥发近干。残液用水溶解并定容至5～10mL，溶液过0.45μm滤膜，滤液用于HPLC 测定。
5.1.4 奶粉：称取2.000g试样，放入200mL烧杯中，加水15.0mL溶解，再加45.0mL无水乙醇，搅匀，放置5min，离心，取上清液30.0mL在沸水浴上挥发近干，残液用水溶解并定容至一定体积，溶液过0.45μm 滤膜，滤液用于HPLC测定。
5.2 高效液相色谱参考条件
5.1.1 色谱柱：不锈钢柱，内径4.6mm，300mm反相氨基柱，粒径5μm。
5.1.2 柱温：45℃，检测室：40℃
5.1.3 流动相：乙腈-水=76:24
5.1.4 流量：1.5mL/min
5.1.5 灵敏度：64
5.1.6 进样量：20μL
5.3 测定：在上述色谱条件下注入标准溶液和试样溶液，以保留时间定性，外标法定量。
6 结果计算（注：功能性异麦芽低聚糖的含量以异麦芽糖、潘糖、异麦芽三糖计）
X =
式中：
X—试样中某低聚糖的含量，g/kg（g/L）；
A—试样的峰面积或峰高；
Ci—单一低聚糖标准溶液的浓度，mg/mL；
Ai—标准溶液的峰面积或峰高；
ｍ—试样质量（或体积），g（mL）；
V—试样定容体积，mL；
f—稀释倍数。
结果保留三位有效数字。
十、保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定
1 适用范围
本方法适用于红茶、绿茶等为主要原料的保健食品中茶氨酸含量的测定。
本方法的最低检出量10ng。
本方法的最佳线性范围：0.1mg/mL～4.2mg/mL。
2 原理：将试样中的茶氨酸用水提取，使用等度洗脱反相高效液相色谱进行分离，紫外检测器（UV）检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量，适用于红茶、绿茶及以茶为原料生产的保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定方法。
3 试剂
除特殊说明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682-2008一级水要求。
3.1 三氟乙酸
3.2 高效液相色谱流动相：等度淋洗
3.3 茶氨酸标准品：含量大于98％（HPLC）
3.4 茶氨酸标准溶液的配制：准确称取3.5mg茶氨酸对照品，溶于水中，用10mL容量瓶定容，摇匀， 此标准溶液浓度为0.35mg/mL。
4 仪器设备
4.1 高效液相色谱仪：附双高压输液泵、紫外检测器
4.2 水浴锅
5 分析步骤
5.1 固体试样的处理：称取粉碎试样适量（相当于含茶氨酸10mg，精确至0.001g），加入30mL H2O，在80℃的水浴锅上加热40min，冷却，离心，过滤后，滤液加水定容至50mL，试样溶液过0.45μm水膜，滤液进行色谱分析。
5.2 液体试样的处理：取一定量的试样在水浴锅上蒸干，残渣以10mL水溶解，溶液过0.45μm水膜，滤液进行色谱分析。
5.3 色谱参考条件
5.3.1 色谱柱：反相C18柱，5μm，100Å，4.6×250mm
5.3.2 检测波长：203nm
5.3.3 等度淋洗条件：pH=3.0的三氟乙酸水溶液
5.3.4 流速：1mL/min
5.3.5 柱温：35℃
5.4 色谱分析
5.4.1 标准曲线的制备：分别取标准溶液2、4、6、10、12μL进行HPLC分析，用峰面积对进样体积绘制茶氨酸的标准回归曲线。
5.4.2 试样测定：取10μL试样净化液进行高效液相色谱分析，以绝对保留时间定性，用峰面积通过茶氨酸的标准曲线定量计算试样中茶氨酸的含量。
6 结果计算
试样中茶氨酸的含量（g/100g）=
式中：
C—试样溶液中茶氨酸的含量，mg/mL；
V—试样定容体积；
m—试样质量，g。
分析结果保留三位有效数字。
十一、保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的高效液相色谱测定
1 范围
本方法适用于以五味子为主要原料的保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和乙素含量的测定。
本方法的检测限分别为五味子醇甲0.02μg、五味子甲素 0.03μg、五味子乙素0.02μg。
本方法的最佳线性范围为0.2～10μg。
2 原理：将试样中的木脂素提取后，使用等度洗脱反相高效液相色谱进行分离，紫外检测器（UV）检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。
3 试剂
除特殊说明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682-2008一级水要求。
3.1 甲醇：色谱纯
3.2 高效液相色谱流动相：等度淋洗
3.3 五味子醇甲、五味子甲素和乙素标准品：含量均大于98％（HPLC）
3.4 五味子醇甲、五味子甲素和乙素标准溶液的配制：配制五味子醇甲、五味子甲素和乙素标准储备液，浓度分别为3mg/mL，再以此储备液配制成混合标准系列溶液，浓度范围为0.02mg/mL～1mg/mL；所有标准溶液均用甲醇配制。
4 仪器
4.1 高效液相色谱仪：附双高压输液泵、紫外检测器
4.2 超声波清洗器
4.3 离心机
5 分析步骤
5.1 试样处理：称取粉碎后适量（相当于含五味子总量30mg，精确至0.001g），置20mL容量瓶中，加入甲醇约18mL，超声提取20min，取出，静置待冷，加甲醇至刻度。试样溶液过0.45μm油膜，滤液进行色谱分析。
5.2 测定
5.2.1 液相色谱参考条件
5.2.1.1 色谱柱：反相C18柱，5μm，100Å，4.6×250mm
5.2.1.2 检测波长：254nm
5.2.1.3 等度淋洗条件：甲醇-水=77:23（v/v）
5.2.1.4 流速：1mL/min
5.2.1.5 柱温：35℃
5.2.2 色谱分析
5.2.2.1 标准曲线的制备：将标准混合系列溶液均取10μL 进HPLC 分析，用峰面积对浓度计算五味子醇甲、五味子甲素和乙素的标准回归曲线。
5.3.2.2 试样测定：取10μL 试样净化液进行高效液相色谱分析，以绝对保留时间定性，用峰面积通过五味子醇甲、五味子甲素和乙素的标准曲线定量计算试样中的含量。
6 结果计算
试样中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的含量（mg/100g）＝
式中：
C—试样溶液中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的含量，mg/mL；
m—试样质量，g。
分析结果保留三位有效数字。
十二、保健食品中腺苷的测定
1 范围
本方法适用于保健食品中腺苷含量的测定。
本方法的检出限：0.04μg。
本方法的线性范围：0.40～60.0μg/mL。
2 原理：将粉碎的胶囊、片剂试样使用水进行提取，根据高效液相色谱法定性定量检测。
3 试剂
除特殊说明，所用试剂均为分析纯；实验用水为一级水。
3.1 磷酸二氢钾
3.2 无水乙醇：优级纯
3.3 甲醇：色谱纯
3.4 提取液：纯化水
3.5 腺苷标准溶液：准确称取腺苷标准品0.0100g，加水溶解并定容至25mL。此溶液每毫升含0.4mg腺苷。
4 仪器
4.1 高效液相色谱仪：附二极管阵列或紫外检测器（UV）
4.2 超声波清洗器
4.3 离心机
5 分析步骤
5.1 试样处理：取固体试样进行粉碎混匀，称取均匀粉末适量（相当于含腺苷0.5mg，精确至0.001g），于25mL容量瓶中，加入约20mL提取液，超声提取10min。取出后加入提取液定容至刻度，混匀后以3000r/min离心3min。经0.45μm滤膜过滤后供液相色谱分析用。
5.2 液相色谱参考条件
5.2.1 色谱柱：C18柱，4.6×150mm，5μm。
5.2.2 柱温：室温
5.2.3 检测波长：254nm
5.2.4 流动相：甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钾溶液=10:90
5.2.5 流速：1.0mL/min
5.2.6 进样量：10μL
5.2.7 色谱分析：取10μL标准溶液及试样溶液注入色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。
5.3 标准曲线的制备：分别配制浓度为0.400、2.00、4.00、20.0、60.0μg/mL腺苷标准溶液，在给定的仪器条件下进行液相色谱分析，以峰高或峰面积对浓度作标准曲线。
5.4 结果计算
X =
式中：
X—试样中腺苷的含量，mg/100g；
h1—试样峰高或峰面积；
C—标准溶液浓度，μg/mL；
V—试样定容体积，mL；
h2—标准溶液峰高或峰面积；
m—试样质量，g。
计算结果保留三位有效数字。
十三、保健食品中壳聚糖脱乙酰度的测定
1 样品测定：取壳聚糖0.5g，加0.3mol/L的盐酸标准溶液20mL搅拌使其完全溶解。加甲基橙作指示剂，用0.1mol/L的氢氧化钠标准溶液滴定至试液由红色变为桔黄色止。
2 结果计算
脱乙酰度=
式中：
M1—盐酸浓度，mol/L；
V1—盐酸用量，mL；
M2—氢氧化钠浓度，mol/L；
V2—氢氧化钠滴定用量，mL；
W—壳聚糖质量，g；
16—氨基（NH2）摩尔质量。
方法一
1 范围
本方法适用于以含皂苷类成分为主要原料的保健食品中总皂苷含量的测定。
本方法的检测限为15ng，定量限为50ng。
本方法的最佳线性范围：0.08mg～0.24mg。
2 原理：试样用水提取总皂苷类成分，经水饱和正丁醇萃取、氨试液洗涤除杂后，试样中的皂苷类成分在高氯酸的作用下与香草醛反应，产生特征的紫红色，采用分光光度法测定总皂苷在560nm处的吸光度进行定量。
3 试剂
除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂、蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。
3.1 水饱和正丁醇：取正丁醇适量，加入适量水，充分振摇，静置使分层，上层液体即为水饱和正丁醇。
3.2 氨试液：取氨水40mL，加水使成100mL，即得
3.3 甲醇
3.4 高氯酸：优级纯
3.5 冰乙酸
3.6 香草醛溶液：称取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100mL。
3.7 人参皂苷Re标准溶液：精密称取人参皂苷Re标准品10mg，用甲醇溶解并定容至50.0mL，即人参皂苷Re浓度为0.2mg/mL。
4 仪器
4.1 紫外/可见分光光度计
4.2 超声波清洗器
4.3 水浴锅
4.4 离心机
4.5 分液漏斗
4.6 分析天平
5 分析步骤
5.1 试样处理
5.1.1 固体试样：称取1.0g左右的样品（或根据试样含总皂苷量定），置于100mL容量瓶中，加水约80mL，超声30min，放冷，再用水定容至100mL，摇匀，放置，滤过，精密吸取续滤液25mL，进行萃取。
5.1.2 液体试样：含乙醇的补酒类保健食品，精密吸取10mL试样置水浴上挥尽乙醇，用水转移至分液漏斗中，并加水至约25mL，进行萃取。
5.1.3 非乙醇类的液体试样：精密吸取10mL试样（或根据试样含总皂苷量定）至分液漏斗中，加水至约25mL，进行萃取。
5.2 萃取：将已处理好的试样（见5.1）置于分液漏斗中，加入水饱和正丁醇振摇萃取3次，每次20mL，分取正丁醇液（必要时可离心），合并正丁醇液用氨试液洗涤3次，每次20mL，分取正丁醇液蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至25mL量瓶中（液体样品则转移至10mL）量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
5.3 样品测定：精密吸取5.2 项下溶液1.0mL（或根据试样含总皂苷量定），置于10mL具塞比色管中，置水浴中挥干溶剂，精密加入0.2mL5%香草醛冰乙酸溶液，再精密加入0.8mL高氯酸，混匀，使残渣都溶解，60℃水浴中加热10min，取出，冰浴冷却后，精密加入冰乙酸5.0mL，摇匀后，立即于560nm波长处与标准管一起进行比色测定。
5.4 人参皂苷Re标准曲线的制备：精密吸取人参皂苷Re标准溶液（3.7）0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL于10mL具塞比色管中，以下操作从5.3 “置水浴中挥干溶剂……”起，与试样同法测定吸光度。
5.5 空白测定：精密吸取5.2项下溶液1.0mL，置于10mL具塞比色管中，置水浴中挥干溶剂，精密加入0.20mL冰乙酸溶液，以下操作从5.3 “再精密加入0.8mL高氯酸……”起，与试样同法测定吸光度，做试样自身校正。
6 结果计算
C×V×100
X = ——————
V0×m×1000
式中：
X—试样中总皂苷量（以人参皂苷Re计），g/100g或g/100mL；
C—经试样自身校正后，由标准曲线算得被测液中总皂苷量，mg；
V—试样稀释体积，mL；
V0—参加显色试样体积，mL；
m—试样取样量，g或mL。
计算结果保留三位有效数字。
方法二
1 试剂
1.1 Amberlite-XAD-2 大孔树脂，购自Sigma化学公司。
1.2 正丁醇：分析纯
1.3 乙醇：分析纯
1.4 中性氧化铝：层析用，100-200目。
1.5 人参皂苷Re：购自中国食品药品检定研究院
1.6 香草醛溶液：称取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100mL。
1.7 高氯酸：分析纯
1.8 冰乙酸：分析纯
1.9人参皂苷Re标准溶液：精确称取人参皂苷Re标准品0.020g， 用甲醇溶解并定容至10.0mL，即每毫升含人参皂苷Re2.0mg。
2 仪器
2.1 比色计
2.2 层析柱
3 分析步骤
3.1试样处理
3.1.1 固体试样：称取1.000g左右的试样（根据试样含人参量定） ，置于100mL容量瓶中，加少量水，超声30min，再用水定容至100mL，摇匀，放置，吸取上清液1.0mL进行柱层析。
3.1.2 液体试样：含乙醇的补酒类保健食品，吸取1.0mL试样放水浴挥干，用水浴溶解残渣，用此液进行柱层析。非乙醇类的液体试样，吸取 1.0mL 试样（假如浓度高或颜色深，需稀释一定体积后再取1.0mL）进行柱层析。
3.2柱层析：用10mL注射器作层析管，内装3cmAmberlite-XAD-2大孔树脂，上加1cm中性氧化铝。先用25mL70%乙醇洗柱，弃去洗脱液，再用25mL水洗柱，弃去洗脱液，精确加入1.0mL已处理好的试样溶液（见3.1） ，用25mL水洗柱，弃去洗脱液，用25mL70%乙醇洗脱人参皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，置于60℃水浴挥干。以此作显色用。
3.3 显色：在上述已挥干的蒸发皿中准确加入 0.2mL5%香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使残渣都溶解， 再加0.8mL高氯酸， 混匀后移入5mL带塞刻度离心管中， 60℃水浴上加热10min，取出，冰浴冷却后，准确加入冰乙酸5.0mL，摇匀后，以1cm比色池于560nm波长处与标准管一起进行比色测定。
3.4 标准管：吸取人参皂苷 Re 标准溶液（2.0mg/mL）100µl，置于蒸发皿中，放在水浴挥干（低于60℃），或热风吹干（勿使过热） ，以下操作从“3.2 柱层析…”起，与试样相同。测定吸光度值。
4 结果计算
A1 V 100 1
X = ———×C×——×————×———
A2 m 1000 1000
式中：
X—试样中总皂苷含量（以人参皂苷Re计） ，g/100g；
A1—被测液的吸光度值；
A2—标准液的吸光度值；
C—标准管人参皂苷Re的量，µg；
V—试样稀释体积，mL；
m—试样质量，g。
计算结果保留三位有效数字。
十五、保健食品中总黄酮的测定
1 范围
本方法适用于以含黄酮类成分为主要原料的保健食品中总黄酮含量的测定。
本方法的检测限（LOD）为50ng；定量限（LOQ）200ng。
本方法的最佳线性范围（以芦丁计）：9.9～59.2μg/mL
2 原理：试样经预处理除杂后，以甲醇或60%乙醇溶液提取黄酮类成分。试样中的黄酮类成分可被亚硝酸钠还原，与硝酸铝生成络合物，在氢氧化钠溶液碱性条件下开环，生成 2-羟基查耳酮而使溶液显特征的橙红色，采用分光光法在510nm波长处测定吸光度，以芦丁为对照品，采用标准曲线法计算样品中总黄酮的含量。
3 试剂
除另有说明，实验中所用试剂均为分析纯；水为蒸馏水或去离子水。
3.1 5％亚硝酸钠溶液：称取5g亚硝酸钠，加水溶解成100mL。
3.2 10％硝酸铝溶液：称取硝酸铝10g，加水溶解成100mL。
3.3 氢氧化钠试液：取氢氧化钠4.3g，加水溶解成100mL。
3.4 石油醚（60～90℃）
3.5 乙醇
3.6 甲醇
3.7 芦丁对照品溶液： 取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，制成浓度为0.2mg/mL的对照品溶液。
4 仪器
4.1 紫外/可见分光光度计
4.2 超声波提取器
4.3 离心机
4.4 分析天平：万分之一及十万分之一
5 分析步骤
5.1 试样处理（试样取样量、供试液取样体积可根据试样中总黄酮的含量适当调整，以保证测定的吸收度值在0.2～0.7范围内）
5.1.1 固体试样：精密称取试样粉末0.4g（M），置索氏提取器中，加石油醚（60～90℃）加热回流提取至提取液无色，弃去石油醚液，样渣挥去石油醚，转移至具塞锥形瓶中，精密加甲醇25mL（V1），密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷至室温，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液作为供试品溶液。
5.1.2 液体试样：精密吸取供试品2mL（M），至25mL（V1）量瓶中，加60%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
5.2 芦丁对照品标准曲线制备：精密吸取芦丁对照品溶液（3.7项）0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0mL，分别置25mL（V3）量瓶中，加水至6mL，加入5%亚硝酸钠溶液1mL，摇匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液1mL，摇匀放置6min，加氢氧化钠试液10mL，摇匀，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以0.0mL对照品溶液制得的溶剂为空白，在波长510nm处分别测定吸收度值。以吸光度为纵坐标(A)，对照品浓度为横坐标（mg/mL），绘制标准曲线。
5.3 样品测定：精密吸取“5.1”项下供试溶液2mL（V2），至25mL量瓶中，照“5.2” 自“加水至6mL”起，在510nm波长处测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含总黄酮的浓度(C)，计算样品中总黄酮的含量（X）。
6 结果计算
C×V1×V3×100
X = ————————
V2×M×1000
式中：
X—试样中总黄酮百分含量，以芦丁(C27H30O16)计， g/100g（mL）；
C—标准曲线上读出供试品溶液中总黄酮的浓度，mg/mL；
V1—试样定容体积，mL；
V2—吸取供试液体积，mL；
V3—显色定容体积，mL；
M—试样取样量，g(mL)。
计算保留三位有效数字。
十六、部分功效成分/标志性成分检测方法国家标准
十七、常用卫生指标检测方法
日期：2013-12-03
| 关于征求保健食品中大蒜素的测定等15个保健食品功效成分或标志性成分检测方法意见的函 |
| 食药监食监三便函〔2013〕143号 |
| 2013年12月02日 发布 |
|
各省、自治区、直辖市食品药品监督管理局，有关单位： 为加强保健食品注册管理，进一步指导和规范保健食品注册检验工作，我司组织修订了《保健食品中大蒜素的测定》等15个保健食品功效成分或标志性成分检测方法。现公开征求意见，请于2013年12月20日前将意见和建议反馈我司。 联系人：李莉 电 话：（010）88330505 传 真：（010）88374394 邮 箱：wangtz@cfda.gov.cn 附件：保健食品中大蒜素的测定等15个保健食品功效成分或标志性成分检测方法（征求意见稿） 国家食品药品监督管理总局食品安全监管三司 2013年12月2日 |
一、保健食品中大蒜素的测定
1 范围
本方法适用于以大蒜及其制品为原料的保健食品中大蒜素（三硫二丙烯，C6H10S3）的含量测定。
本方法最低检出浓度为0.0430mg/mL；取100mg试样，提取定容5.0mL时，试样中大蒜素最低检出质量浓度为0.20g/100g。
本方法最佳线性范围： 0.320mg/mL～3.00 mg/mL。
2 原理：根据大蒜素为挥发性油成分，经有机溶剂提取，用气相色谱仪分析，采用外标法定量。
3 试剂
除特殊说明，所用试剂均为分析纯。
3.1 无水乙醇
3.2 正己烷
3.3 标准溶液：称取0.1000g标准品，置于10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，该溶液中含大蒜素浓度为10.0mg/mL。此溶液可在冰箱中保存七天。取该溶液1.0mL，置于10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，此溶液含大蒜素浓度为1.0mg/mL。
4 仪器
4.1 气相色谱仪：附氢火焰（FID）检测器
4.2 数据处理机或积分仪
4.3 分析天平：万分之一
4.4 超声清洗机
4.5 离心机：3000r/min
5 分析方法
5.1 试样提取
5.1.1 固体试样：称取试样适量（相当于含大蒜素5mg，精确至0.001g），加无水乙醇适量，密塞，超声70min，取出冷却，加正己烷定容（调节大蒜素含量约为1mg/mL），振摇，静置分层后，取上层溶液进样。
5.1.2 液体试样 吸取试样适量（相当于含大蒜素5mg，精确至0.001g），置于分液漏斗中，加5mL正己烷振摇提取1min，静置（或离心）分层后，取上层溶液进样。
5.2 气相色谱参考条件
5.2.1 色谱柱：HP-5(30m×0.25mm)
5.2.2 柱箱温度：100℃（3min）
5.2.3 进样口温度：220℃
5.2.4 检测器温度：250℃
5.2.5 载气：氮气（1mL/min）
5.2.6 氢气：40mL/min；空气：400mL/min
5.2.7 进样量：1μL
5.3 定性分析：在参考操作条件下，以对照品与试样比较保留时间定性。
5.4 定量分析：试样中大蒜素色谱峰面积或峰高与标准的色谱峰面积或峰高比较定量。
5.5 结果计算
W =
×100式中：
W—大蒜素的含量，g/100g（g/100mL）；
A1—试样使用液色谱峰面积或峰高；
A2—标准使用液峰面积或峰高；
C—标准使用液浓度，mg/mL；
V—试样定容体积，mL；
m—试样量，g（mL）。
计算结果保留三位有效数字。
二、保健食品中芦荟苷的测定
1 范围
本方法适用于以芦荟及其制品为原料的保健食品中芦荟苷含量的测定。
本方法的最低检出量10ng。
本方法的最佳线性范围：0～100μg/mL
2 原理：用甲醇+水（55+45）作为溶剂，提取试样中的芦荟苷，经高效液相色谱仪C18 柱分离，在紫外293nm 波长下检测，以芦荟苷保留时间定性，峰面积定量。
3 试剂
除特殊说明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682-2008一级水要求。
3.1 甲醇：色谱纯
3.2 芦荟苷标准品：纯度≥98%
3.3 芦荟苷标准溶液：精确称取芦荟苷标准品10.0mg，加流动相甲醇+水（55+45）溶解并移入100mL容量瓶中，定容至刻度。精密移取5mL至10mL容量瓶中，加流动相定容至刻度。
4 仪器设备
4.1 高效液相色谱仪：附二极管阵列或紫外检测器
4.2 色谱柱：C18（以十八烷基键合硅胶填料为填充剂）或具同等性能的色谱柱，150mm×6mm，5μm。
4.3 超声波清洗器
4.4 C18净化富集柱C18预柱装量0.5g：分配型
4.5 离心机：3000r/min
5 色谱参考条件
5.1 流动相：甲醇+水=55+45
5.2 流速：1mL/min
5.3 柱温：40℃
5.4 检测波长：293nm
5.5 灵敏度：0.016AUFS
5.6 进样量：10μL
6 分析步骤
6.1 试样制备：将固体试样粉碎成粉末状，混匀，称取适量试样（相当于含芦荟苷2.5mg，精确至0.001g）于50mL容量瓶中，加检测用流动相30mL，混匀，经超声振提5min，加流动相定容50mL，离心沉淀，上清液经滤膜（0.45μm）过滤，芦荟汁饮料直接经0.45μm 滤膜过滤。
6.2 测定步骤：分别精密吸取标准溶液和试样溶液10μL 注入高效液相色谱仪，依上述色谱条件，以保留时间定性，用外标法计算试样中芦荟苷的含量。
7 结果计算
X =
式中：
X—试样中芦荟苷含量，mg/g（mg/mL）；
A1—试样中芦荟苷的峰面积或峰高；
C—标准液的质量浓度，mg/mL；
A2—标准液中芦荟苷的峰面积或峰高；
V—试样定容体积，mL；
m—试样的质量，g（mL）。
计算结果保留三位有效数字。
三、保健食品中红景天苷的测定
1 范围
本方法适用于以红景天为原料的保健食品中红景天苷的测定。
本方法的检出限：0.5mg/mL。
本方法的线性范围：0.01～0.50mg/mL。
2 原理：混匀的保健食品试样经70%乙醇超声波提取，聚酰胺柱净化后，以0.01mol/L NH4Ac-甲醇为流动相（80：20），采用高效液相色谱法，紫外检测器，根据保留时间定性，标准曲线法定量检测。
3 试剂
试验用水为重蒸水。
3.1 乙酸铵：分析纯
3.2 甲醇：色谱纯
3.3 乙醇：分析纯
3.4 柱层析用聚酰胺粉（粒度：30～60目）
3.5 红景天苷标准溶液 准确称量红景天苷标准品0.0200g，加入甲醇溶解并定容至10mL。此溶液每毫升含2.0mg红景天苷。
4 仪器
4.1 高效液相色谱仪： 附紫外检测器（UV）
4.2 超声波清洗器
4.3 离心机
4.4 聚酰胺净化柱：用5mL玻璃注射器（长75mm，内径为12mm） 作层析柱，底部放少许脱脂棉，内装层析用聚酰胺粉 1.0g。
5 分析步骤
5.1 试样处理
5.1.1 固体样品：取20粒以上片剂或胶囊试样进行粉碎、混匀，准确称取适量试样（精确至0.001g），用70％乙醇超声波萃取30min，定容至25mL。混匀，静置后，取10.00mL上清液于蒸发皿中，于沸水浴上挥干溶剂，用3mL水（分3～4次）溶解残渣并转移至聚酰胺柱上，待过柱后再用10mL水分数次洗脱柱中吸附的红景天苷，控制洗脱液流速为0.5～0.8mL/min，收集所有的洗脱液，定容至10.00mL，混匀后经0.45μm滤膜过滤，供液相色谱分析用。
5.1.2 液体样品：根据样品中红景天苷的含量，准确吸取一定量摇匀后的试样（1～10mL）于蒸发皿中去除溶剂（若试样中不含乙醇，则可直接过聚酰胺柱），其余步骤同上。
5.2 色谱参考条件
5.2.1 色谱柱：C18柱，4.6×250mm,5μm。
5.2.2 柱温：25℃
5.2.3 检测波长：215nm
5.2.4 流动相：甲醇-0.01mol/L乙酸铵溶液＝20:80
5.2.5 流速：1.0mL/min
5.2.6 进样量：10mL
5.3 标准曲线制备：分别配制浓度为0.0、0.01、0.02、0.05、0.20、0.50 mg/mL红景天苷标准溶液,在给定的仪器条件下进行液相色谱分析,以红景天苷的浓度为横坐标，相应的色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线或进行线性回归。
6 测定：取10μL标准溶液及试样溶液注入色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰面积与标准系列比较定量。
7 结果计算
Ｃ×Ｖ
X = —————
m×1000
式中：
X—试样中红景天苷的含量，mg/g（mg/mL）；
C—由标准曲线上查出待测样液中红景天苷的浓度（mg/mL）；
V—样品的定容体积，mL；
m—样品量，g（mL）。
计算结果保留2位有效数字。
四、保健食品中肉碱的测定
1 范围
本方法适用于以肉碱为主要原料的保健食品中肉碱的测定。
本方法最低检出量为0.27μg。
本方法最佳线性范围：0.050mg/mL～2.0mg/mL。
2 原理：试样中的肉碱以0.5mmol/L的盐酸超声提取，反相色谱分离，与标准品的保留时间比较定性，以峰面积外标法定量。
3 试剂
除特殊说明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682-2008一级水要求。
3.1 磷酸氢二钾
3.2 辛烷磺酸钠
3.3 0.50mmol/L盐酸
3.4 肉碱标准溶液：精密称取干燥至恒重的肉碱标准品（含量98%）0.0200g，用0.50mmol/L盐酸溶解并定容为10.0mL，此溶液浓度为2.0mg/mL。
4 仪器
4.1 高效液相色谱仪：配有二极管阵列或紫外检测器和色谱工作站或记录仪
4.2 超声波提取器
4.3 溶剂微孔过滤器：带0.45μm 水相滤膜。
5 分析步骤
5.1 试样预处理：称取粉碎并混合均匀的试样适量（相当于含肉碱约40mg，精确至0.001g），液体试样取5.0mL，于50mL容量瓶中，加入0.50mmol/L 盐酸约35mL，超声提取10min，用0.50mmol/L 盐酸定容，混匀，过滤，弃初滤液数毫升，收集滤液，过0.45μm 水相滤膜，为试样处理液。供HPLC分析。
5.2 试样分析
5.2.1 色谱参考条件：Shim-pakCLC ODS柱，4.6×200mm，10μm。
5.2.2 流动相：水相[0.05mol/L（8.7g） 磷酸氢二钾溶液，0.002mol/L（0.4325g）辛烷磺酸钠，用磷酸调至pH2.5]-乙腈=90:10
5.2.3 流速：0.8mL/min
5.2.4 检测波长：210nm
5.3 标准曲线的制备：分别取标准溶液0.0、0.25、0.50、1.0、2.0、2.5、5.0mL标准溶液（3.4）于5mL容量瓶中，用0.50mmol/L盐酸稀释并定容为5.0mL，分别进样20mL进行色谱分析。用标准浓度—峰面积绘制标准曲线。
5.4 试样测定：取20mL试样处理液（5.1）注入色谱仪中，以保留时间定性，面积定量。
5.5 结果计算
C×V
X = ———
m
式中：
X—为试样中肉碱的含量，mg/g；
m—为试样质量，g；
C—为试样处理液中肉碱的浓度，mg/mL；
V—为试样处理液体积，mL。
结果保留三位有效数字。
五、保健食品中人参皂苷的高效液相色谱测定
1 适用范围
本方法适用于以人参为主要原料的保健食品中人参皂苷含量的测定。
本方法的六种皂苷的最低检出量为 10mg/kg。
本方法的六种皂苷的最佳线性范围：0.1mg/mL～1mg/mL。
2 原理：将试样中的人参皂苷溶解、提取，经净化处理后，使用梯度洗脱反相高效液相色谱进行分离，紫外检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量，适用于保健食品中人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd的同时定量分析。
3 试剂
除特殊说明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682-2008一级水要求。
3.1 乙腈：色谱纯，200nm吸光度值为0.021
3.2 甲醇
3.3 D101大孔吸附树脂
3.4 高效液相色谱流动相：梯度淋洗A液为乙腈，B液为水。
3.5 人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd标准品：含量大于98%（HPLC）
3.6 人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd标准溶液的配制：配制人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd标准储备液，浓度分别为10mg/mL；再以此储备液配制成混合标准系列溶液，浓度范围为0.1mg/mL～1mg/mL；所有标准溶液均用甲醇配制。
4 仪器设备
4.1 高效液相色谱仪：附二极管阵列或紫外检测器
4.2 超声波清洗器
4.3 离心机
4.4 水浴锅
5 分析步骤
5.1 固体试样处理：取试验研成粉末，并过20目筛。称取该粉末样适量（相当于含总人参皂苷约75mg，精确至0.001g），于50mL具塞试管中，加水50mL于超声波清洗器中超声提取30分钟，取出，待溶液恢复常温后，准确取出10mL，通过D101大孔吸附树脂净化柱（大孔吸附树脂使用前先经甲醇浸泡，水洗，装成10cm长小柱），小柱先用10mL水冲洗，弃去水液之后，用70%甲醇25mL洗脱皂苷，收集甲醇溶液，水浴上蒸干，残渣以甲醇溶解并定容至5mL，该样液离心后过0.5μm膜，滤液进行色谱分析。
5.2 液体试样处理：取一定量的试样于水浴上蒸干，残渣以50mL水超声提取30分钟，余下步骤与5.1相同。
5.3 测定
5.3.1 液相色谱参考条件
5.3.1.1 色谱柱：反相C18柱，4.6×250mm，5μm
5.3.1.2 检测波长：203nm
5.3.1.3 梯度淋洗条件
| 时间（min） | 乙腈（％） | 水（％） | 流速（mL/min） | 梯度曲线 |
|
0 20 55 65 75 80 |
16 18 40 40 100 16 |
84 82 60 60 0 84 |
1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 |
1 6 6 6 1 1 |
5.3.2 色谱分析
5.3.2.1 标准曲线的制备：将混合标准系列溶液均取5μL进HPLC分析，用峰面积对浓度作各皂苷的标准回归曲线。
5.3.2.2 试样测定：取5μL试样净化液进高效液相色谱分析，以绝对保留时间定性，用峰面积通过各皂苷的标准曲线定量，计算试样中人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd的含量。
6 结果计算
Ｃ×5×5×100
试样中各人参皂苷的含量（g/100g）= ———————
m×1000
式中：
C—试样溶液中各人参皂苷的含量，mg/mL；
m—试样量，g（mL）。
试样中总人参皂苷的含量= CRe＋CRg1＋CRb1＋CRc＋CRb2＋CRd
式中：
CRe—试样中Re的含量，g/100g（g/100mL）；
CRg1—试样中Rg1的含量，g/100g（g/100mL）；
CRb1—试样中Rb1的含量，g/100g（g/100mL）；
CRc—试样中Rc的含量，g/100g（g/100mL）；
CRb2—试样中Rb2的含量，g/100g（g/100mL）；
CRd—试样中Rd的含量，g/100g（g/100mL）。
计算结果保留三位有效数字
六、保健食品中核苷酸的测定
1 范围
本方法规定了保健食品中核苷酸的高效液相色谱测定方法。
本方法检出限：胞嘧啶核苷（CMP）0.04μg/mL、脲嘧啶核苷（UMP）0.05μg/mL、腺嘌呤核苷（AMP）0.05μg/mL、鸟嘌呤核苷（GMP）0.06μg/mL。
本方法线性范围：胞嘧啶核苷（CMP）0.992～12.4μg/mL、脲嘧啶核苷（UMP）1.17～14.6μg/mL、腺嘌呤核苷（AMP）1.01～12.6μg/mL、鸟嘌呤核苷（GMP）0.948～12.3μg/mL。
2 原理：将试样溶解、去除蛋白后， 使用氨基固相萃取柱对核苷酸进行净化富集，根据高效液相色谱紫外检测器在254nm处的响应进行定性定量。
3 试剂
除特殊说明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682-2008一级水要求。
3.1 甲醇：优级纯
3.2 乙酸
3.3 磷酸二氢钾
3.4 磷酸氢二钾
3.5 季铵盐固相萃取柱
3.6 核苷酸标准储备溶液：准确称量经100℃干燥4h处理的标准品胞嘧啶核苷（CMP）100mg，脲嘧啶核苷（UMP）、腺嘌呤核苷（AMP）、鸟嘌呤核苷（GMP）各40mg，加水定容至100mL。
3.7 核苷酸标准使用液： 将核苷酸标准储备溶液用0.25mol/L，pH=3的磷酸二氢钾稀释100倍。
4 仪器设备：高效液相色谱仪（附二极管阵列或紫外检测器）
5 分析步骤
5.1 试样处理
5.1.1 称取试样适量（相当于含核苷酸约6.5mg，精确至0.001g），于100mL容量瓶中，加入约50℃热水80mL，彻底混匀。当试样液达到室温后用水定容至刻度。
5.1.2 准确吸取10mL试样溶液至100mL容量瓶中，加入0.5％乙酸5mL、水10mL，混匀后静置5min以沉淀蛋白。用水定容至刻度，混匀后过滤，弃去数毫升初滤液后收集约30mL滤液。
5.1.3 将季铵盐固相萃取柱先用10mL甲醇、10mL水活化后，再将20mL试样滤液过滤，以1mL水清洗萃取柱，用0.25mol/L，pH=3.5磷酸二氢钾溶液洗脱出5mL滤液。全部过程需要控制流速1滴/秒。
5.2 液相色谱参考条件
5.2.1 色谱柱：C18 柱 3.9×150mm
5.2.2 柱温：25℃
5.2.3 检测波长：254nm
5.2.4 流动相：0.01mol/L磷酸二氢钾-0.1mol/L磷酸氢二钾=480:20
5.2.5 流速：0.6mL/min
5.2.6 进样量：10μL
5.2.7 色谱分析：量取10μL标准溶液及试样溶液注入色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。
5.3 标准曲线的制备：分别配制浓度为1.0、2.0、5.0、10.0、16.0μg/mL的4种核苷酸标准溶液，在给定的仪器条件下进行液相色谱分析，以峰高或峰面积对浓度作标准曲线。
6 结果计算
h1×C×K×5×100
X = ————————
h2×m×1000
式中：
X—试样中核苷酸的含量，mg/100g；
h1—试样峰高或峰面积；
C—标准溶液浓度，μg/mL；
K—稀释倍数；
h2—标准溶液峰高或峰面积；
m—试样量，g。
试样中总核苷酸的含量为胞嘧啶核苷（CMP）、脲嘧啶核苷（UMP）、腺嘌呤核苷（AMP）、鸟嘌呤核苷（GMP）含量之和。
检测结果保留三位有效数字。
七、保健食品中洛伐他汀含量测定
1 范围
本方法适用于以红曲为原料的保健食品中洛伐他汀含量的测定。
本方法的最低检出量2.0mg/kg。
本方法的最佳线性范围2.00～300μg/mL。
2 原理：将酸性介质中的试样使用三氯甲烷进行提取，挥干提取溶剂，以流动相定容，根据高效液相色谱紫外检测器在238nm处的响应进行定性定量。
3 试剂
除特殊说明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682-2008一级水要求。
3.1 甲醇：色谱纯
3.2 三氯甲烷
3.3 磷酸
3.4 洛伐他汀标准储备液：准确称量洛伐他汀标准品0.0400g，加入检测用流动相并定容至100mL。此溶液每毫升含0.4mg洛伐他汀。
3.5 洛伐他汀标准使用液：将洛伐他汀标准储备液用流动相稀释10倍。此溶液每毫升含40μg洛伐他汀。
4 仪器设备
4.1 高效液相色谱仪：附二极管阵列或紫外检测器（UV）
4.2 超声波清洗器
4.3 涡旋混匀器
4.4 离心机
4.4 真空泵
5 分析步骤
5.1 试样处理
5.1.1 将片剂、胶囊或红曲发酵产物试样粉碎并混合均匀，称取试样适量（相当于含洛伐他汀约10mg，精确至0.001g），于50mL试管中，加入10.0mLpH=3 磷酸水溶液。超声提取10min后再加入10.0mL三氯甲烷，置于涡旋混匀器3min。静置后去掉上层水相，将三氯甲烷层以3000r/min，离心3min。
5.1.2 准确吸取上清液1.0mL至5mL试管中，将试管置于50℃左右水浴中使用真空泵减压干燥至挥去全部溶剂。
5.1.3 向试管中加入流动相并定容至5.0mL，彻底混匀，经0.45μm 滤膜过滤后待进样。
5.2 液相色谱参考条件
5.2.1 色谱柱：C18柱，4.6×250mm。
5.2.2 柱温：室温
5.2.3 检测波长：238nm
5.2.4 流动相：甲醇-水-磷酸=385:115:0.14
5.2.5 流速：1.0mL/min
5.2.6 进样量：10μL
5.2.7 色谱分析：量取10μL标准溶液系列及试样溶液注入色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。
5.3 标准曲线制备：配制浓度为2.0、10、50、100、300μg/mL洛伐他汀标准溶液，在给定的仪器条件下进行液相色谱分析，以峰高或峰面积对浓度作标准曲线。
5.4 结果计算
X =
式中：
X—试样中洛伐他汀的含量，g/100g；
h1—试样峰高或峰面积；
c—标准溶液浓度，mg/mL；
50—试样稀释倍数；
h2—标准溶液峰高或峰面积；
m—试样量，g。
检测结果保留三位有效数字。
八、保健食品中槲皮素、山柰素、异鼠李素的高效液相色谱测定
1 范围
本方法适用于以银杏叶或银杏叶提取物为主要原料的保健食品中槲皮素、山柰素、异鼠李素含量的测定。
本方法的检测限分别为：槲皮素0.002μg、山柰素0.003μg、异鼠李素0.005μg。
本方法的最佳线性范围为10μg/mL～100μg/mL。
2 原理：试样经提取、水解等前处理后，使用等度洗脱反相高效液相色谱进行分离，紫外检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量，测定试样中苷元槲皮素、山柰素、异鼠李素含量。
3 试剂
除特殊说明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682-2008一级水要求。
3.1 甲醇：色谱纯
3.2 高效液相色谱流动相：甲醇-水=50:50（以磷酸调节pH=2.5）
3.3 槲皮素、山柰素、异鼠李素标准品：含量大于98％（HPLC）
3.4 槲皮素、山柰素、异鼠李素标准溶液：分别准确称取100mg槲皮素、山柰素、异鼠李素标准品于100mL 容量瓶中，加入甲醇溶解后，定容至刻度，此溶液浓度为1.0mg/mL，将该液稀释成10～100μg/L的标准系列溶液。
4 仪器设备
4.1 高效液相色谱仪：附二极管阵列或紫外检测器
4.2 水浴锅
4.3 超声波清洗器
4.4 离心机
5 分析步骤
5.1 试样处理：取试样适量（相当于含总黄酮约3mg，精确至0.001g），用20mL甲醇于超声波浴中提取30分钟，过滤后滤液加入20mL 1.5mol/L盐酸于水浴上回流水解3小时，冷却后用甲醇定容至50mL，该样液过0.5μm膜，滤液进HPLC分析。
5.2 测定
5.2.1 液相色谱参考条件
5.2.1.1 色谱柱：反相C18 柱，5μm，100Å，3.9mm ID×150mm
5.2.1.2 检测波长：360nm
5.2.1.3 流速：1.0mL/min
5.2.1.4 柱温：室温
5.3.1 色谱分析：取10μL标准溶液及试样提取液进高效液相色谱分析，以保留时间定性，用峰面积以外标法定量计算试样中槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量。
6 结果计算
X% = Q% + K% + I%
式中：
X%—试样中槲皮素、山柰素、异鼠李素的总含量；
Q%—试样中槲皮素含量；
K%—试样中山柰素含量；
I%—试样中异鼠李素含量。
样品中银杏叶总黄酮苷的含量（%）= X%×2.51
7 结果表示：分析结果保留三位有效数字。
九、保健食品中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的测定
1 范围
本方法适用于保健食品中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的含量测定。
本方法最低检出量：异麦芽糖2μg；潘糖5μg；异麦芽三糖10μg；蔗果三糖（GF2）5μg蔗果四糖（GF3）5μg；蔗果五糖（GF4）10μg；棉籽糖20μg；水苏糖30μg。
2 原理：试样除去蛋白后，离心、脱色，用液相色谱分析，用NH2 柱分离，示差检测器测定，外标法定量。
3 试剂
除特殊说明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682-2008一级水要求。
3.1 乙腈：色谱纯
3.2 无水乙醇
3.3 麦芽糖、异麦芽糖、潘糖、麦芽三糖、异麦芽三糖、棉籽糖、水苏糖（含量≥98%）
3.4 低聚果糖（总含量≥96%，其中GF2 38%，GF3 51%，GF4 7%）
3.5 麦芽糖、异麦芽糖混合标准溶液：分别称取麦芽糖10.0mg，异麦芽糖15.0mg，潘糖9.0mg，麦芽三糖15.0mg，异麦芽三糖12.0mg，用水溶解并定容至1.0mL。将此溶液逐级稀释成下列浓度：
标准溶液名称：麦芽糖、异麦芽糖、潘糖、麦芽三糖、异麦芽三糖 （mg/mL）
1 0.50 0.75 0.45 0.75 0.60
2 1.00 1.50 0.90 1.50 1.20
3 2.00 3.00 1.80 3.00 2.40
4 10.00 15.00 9.00 15.00 12.00
3.6 低聚果糖标准溶液：精密称取含 GF2 38%、GF3 51%、GF4 7%的低聚果糖标准品0.0500g，用水溶解并定容至2.50mL。将此液逐级稀释成下列浓度：
标准溶液名称： GF2、 GF3、 GF4（mg/mL）
1 1.50 2.00 0.30
2 3.00 4.00 0.60
3 4.50 6.00 0.90
4 6.00 8.00 1.20
5 7.50 10.00 1.40
3.7 棉籽糖、水苏糖标准溶液：精密称取棉籽糖0.0400g、水苏糖0.0600g，用水溶解并定容至4.0mL。将此液逐级稀释成下列浓度：
标准溶液名称： 棉籽糖 水苏糖（mg/mL）
1 2.0 3.0
2 4.0 6.0
3 6.0 9.0
4 8.0 12.0
5 10.0 15.0
由于试样中程度不同的含有葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖，所以在配制标准应用液时可加入适量的葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖，主要是用于定性。
将各标准系列注入高效液相色谱仪进行测定，绘制标准工作曲线。
4 仪器
4.1 高效液相色谱仪（附带示差检测器）
4.2 离心机：10000r/min
4.3 分析天平：1/10000
4.4 分析天平：1/1000
5 分析步骤
5.1 试样制备
5.1.1 糖浆和糖粉：称取1.0000g糖浆或0.2000g糖粉，用水稀释或溶解，并定容置10.0mL，摇匀，溶液过0.45μm 滤膜，滤液用于HPLC测定。
5.1.2 不含乳液体饮料：饮料直接离心，上清液过0.45μm 滤膜，滤液用于HPLC测定。
5.1.3 含乳液体饮料: 取10.0mL 试样放入烧杯中，加无水乙醇30mL，搅拌混匀，放置5min，离心，取上清液20 mL 在沸水浴上挥发近干。残液用水溶解并定容至5～10mL，溶液过0.45μm滤膜，滤液用于HPLC 测定。
5.1.4 奶粉：称取2.000g试样，放入200mL烧杯中，加水15.0mL溶解，再加45.0mL无水乙醇，搅匀，放置5min，离心，取上清液30.0mL在沸水浴上挥发近干，残液用水溶解并定容至一定体积，溶液过0.45μm 滤膜，滤液用于HPLC测定。
5.2 高效液相色谱参考条件
5.1.1 色谱柱：不锈钢柱，内径4.6mm，300mm反相氨基柱，粒径5μm。
5.1.2 柱温：45℃，检测室：40℃
5.1.3 流动相：乙腈-水=76:24
5.1.4 流量：1.5mL/min
5.1.5 灵敏度：64
5.1.6 进样量：20μL
5.3 测定：在上述色谱条件下注入标准溶液和试样溶液，以保留时间定性，外标法定量。
6 结果计算（注：功能性异麦芽低聚糖的含量以异麦芽糖、潘糖、异麦芽三糖计）
X =
式中：
X—试样中某低聚糖的含量，g/kg（g/L）；
A—试样的峰面积或峰高；
Ci—单一低聚糖标准溶液的浓度，mg/mL；
Ai—标准溶液的峰面积或峰高；
ｍ—试样质量（或体积），g（mL）；
V—试样定容体积，mL；
f—稀释倍数。
结果保留三位有效数字。
十、保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定
1 适用范围
本方法适用于红茶、绿茶等为主要原料的保健食品中茶氨酸含量的测定。
本方法的最低检出量10ng。
本方法的最佳线性范围：0.1mg/mL～4.2mg/mL。
2 原理：将试样中的茶氨酸用水提取，使用等度洗脱反相高效液相色谱进行分离，紫外检测器（UV）检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量，适用于红茶、绿茶及以茶为原料生产的保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定方法。
3 试剂
除特殊说明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682-2008一级水要求。
3.1 三氟乙酸
3.2 高效液相色谱流动相：等度淋洗
3.3 茶氨酸标准品：含量大于98％（HPLC）
3.4 茶氨酸标准溶液的配制：准确称取3.5mg茶氨酸对照品，溶于水中，用10mL容量瓶定容，摇匀， 此标准溶液浓度为0.35mg/mL。
4 仪器设备
4.1 高效液相色谱仪：附双高压输液泵、紫外检测器
4.2 水浴锅
5 分析步骤
5.1 固体试样的处理：称取粉碎试样适量（相当于含茶氨酸10mg，精确至0.001g），加入30mL H2O，在80℃的水浴锅上加热40min，冷却，离心，过滤后，滤液加水定容至50mL，试样溶液过0.45μm水膜，滤液进行色谱分析。
5.2 液体试样的处理：取一定量的试样在水浴锅上蒸干，残渣以10mL水溶解，溶液过0.45μm水膜，滤液进行色谱分析。
5.3 色谱参考条件
5.3.1 色谱柱：反相C18柱，5μm，100Å，4.6×250mm
5.3.2 检测波长：203nm
5.3.3 等度淋洗条件：pH=3.0的三氟乙酸水溶液
5.3.4 流速：1mL/min
5.3.5 柱温：35℃
5.4 色谱分析
5.4.1 标准曲线的制备：分别取标准溶液2、4、6、10、12μL进行HPLC分析，用峰面积对进样体积绘制茶氨酸的标准回归曲线。
5.4.2 试样测定：取10μL试样净化液进行高效液相色谱分析，以绝对保留时间定性，用峰面积通过茶氨酸的标准曲线定量计算试样中茶氨酸的含量。
6 结果计算
试样中茶氨酸的含量（g/100g）=
式中：
C—试样溶液中茶氨酸的含量，mg/mL；
V—试样定容体积；
m—试样质量，g。
分析结果保留三位有效数字。
十一、保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的高效液相色谱测定
1 范围
本方法适用于以五味子为主要原料的保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和乙素含量的测定。
本方法的检测限分别为五味子醇甲0.02μg、五味子甲素 0.03μg、五味子乙素0.02μg。
本方法的最佳线性范围为0.2～10μg。
2 原理：将试样中的木脂素提取后，使用等度洗脱反相高效液相色谱进行分离，紫外检测器（UV）检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。
3 试剂
除特殊说明，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682-2008一级水要求。
3.1 甲醇：色谱纯
3.2 高效液相色谱流动相：等度淋洗
3.3 五味子醇甲、五味子甲素和乙素标准品：含量均大于98％（HPLC）
3.4 五味子醇甲、五味子甲素和乙素标准溶液的配制：配制五味子醇甲、五味子甲素和乙素标准储备液，浓度分别为3mg/mL，再以此储备液配制成混合标准系列溶液，浓度范围为0.02mg/mL～1mg/mL；所有标准溶液均用甲醇配制。
4 仪器
4.1 高效液相色谱仪：附双高压输液泵、紫外检测器
4.2 超声波清洗器
4.3 离心机
5 分析步骤
5.1 试样处理：称取粉碎后适量（相当于含五味子总量30mg，精确至0.001g），置20mL容量瓶中，加入甲醇约18mL，超声提取20min，取出，静置待冷，加甲醇至刻度。试样溶液过0.45μm油膜，滤液进行色谱分析。
5.2 测定
5.2.1 液相色谱参考条件
5.2.1.1 色谱柱：反相C18柱，5μm，100Å，4.6×250mm
5.2.1.2 检测波长：254nm
5.2.1.3 等度淋洗条件：甲醇-水=77:23（v/v）
5.2.1.4 流速：1mL/min
5.2.1.5 柱温：35℃
5.2.2 色谱分析
5.2.2.1 标准曲线的制备：将标准混合系列溶液均取10μL 进HPLC 分析，用峰面积对浓度计算五味子醇甲、五味子甲素和乙素的标准回归曲线。
5.3.2.2 试样测定：取10μL 试样净化液进行高效液相色谱分析，以绝对保留时间定性，用峰面积通过五味子醇甲、五味子甲素和乙素的标准曲线定量计算试样中的含量。
6 结果计算
试样中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的含量（mg/100g）＝
式中：
C—试样溶液中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的含量，mg/mL；
m—试样质量，g。
分析结果保留三位有效数字。
十二、保健食品中腺苷的测定
1 范围
本方法适用于保健食品中腺苷含量的测定。
本方法的检出限：0.04μg。
本方法的线性范围：0.40～60.0μg/mL。
2 原理：将粉碎的胶囊、片剂试样使用水进行提取，根据高效液相色谱法定性定量检测。
3 试剂
除特殊说明，所用试剂均为分析纯；实验用水为一级水。
3.1 磷酸二氢钾
3.2 无水乙醇：优级纯
3.3 甲醇：色谱纯
3.4 提取液：纯化水
3.5 腺苷标准溶液：准确称取腺苷标准品0.0100g，加水溶解并定容至25mL。此溶液每毫升含0.4mg腺苷。
4 仪器
4.1 高效液相色谱仪：附二极管阵列或紫外检测器（UV）
4.2 超声波清洗器
4.3 离心机
5 分析步骤
5.1 试样处理：取固体试样进行粉碎混匀，称取均匀粉末适量（相当于含腺苷0.5mg，精确至0.001g），于25mL容量瓶中，加入约20mL提取液，超声提取10min。取出后加入提取液定容至刻度，混匀后以3000r/min离心3min。经0.45μm滤膜过滤后供液相色谱分析用。
5.2 液相色谱参考条件
5.2.1 色谱柱：C18柱，4.6×150mm，5μm。
5.2.2 柱温：室温
5.2.3 检测波长：254nm
5.2.4 流动相：甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钾溶液=10:90
5.2.5 流速：1.0mL/min
5.2.6 进样量：10μL
5.2.7 色谱分析：取10μL标准溶液及试样溶液注入色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。
5.3 标准曲线的制备：分别配制浓度为0.400、2.00、4.00、20.0、60.0μg/mL腺苷标准溶液，在给定的仪器条件下进行液相色谱分析，以峰高或峰面积对浓度作标准曲线。
5.4 结果计算
X =
式中：
X—试样中腺苷的含量，mg/100g；
h1—试样峰高或峰面积；
C—标准溶液浓度，μg/mL；
V—试样定容体积，mL；
h2—标准溶液峰高或峰面积；
m—试样质量，g。
计算结果保留三位有效数字。
十三、保健食品中壳聚糖脱乙酰度的测定
1 样品测定：取壳聚糖0.5g，加0.3mol/L的盐酸标准溶液20mL搅拌使其完全溶解。加甲基橙作指示剂，用0.1mol/L的氢氧化钠标准溶液滴定至试液由红色变为桔黄色止。
2 结果计算
脱乙酰度=
式中：
M1—盐酸浓度，mol/L；
V1—盐酸用量，mL；
M2—氢氧化钠浓度，mol/L；
V2—氢氧化钠滴定用量，mL；
W—壳聚糖质量，g；
16—氨基（NH2）摩尔质量。
十四、保健食品中总皂苷的测定
方法一
1 范围
本方法适用于以含皂苷类成分为主要原料的保健食品中总皂苷含量的测定。
本方法的检测限为15ng，定量限为50ng。
本方法的最佳线性范围：0.08mg～0.24mg。
2 原理：试样用水提取总皂苷类成分，经水饱和正丁醇萃取、氨试液洗涤除杂后，试样中的皂苷类成分在高氯酸的作用下与香草醛反应，产生特征的紫红色，采用分光光度法测定总皂苷在560nm处的吸光度进行定量。
3 试剂
除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂、蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。
3.1 水饱和正丁醇：取正丁醇适量，加入适量水，充分振摇，静置使分层，上层液体即为水饱和正丁醇。
3.2 氨试液：取氨水40mL，加水使成100mL，即得
3.3 甲醇
3.4 高氯酸：优级纯
3.5 冰乙酸
3.6 香草醛溶液：称取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100mL。
3.7 人参皂苷Re标准溶液：精密称取人参皂苷Re标准品10mg，用甲醇溶解并定容至50.0mL，即人参皂苷Re浓度为0.2mg/mL。
4 仪器
4.1 紫外/可见分光光度计
4.2 超声波清洗器
4.3 水浴锅
4.4 离心机
4.5 分液漏斗
4.6 分析天平
5 分析步骤
5.1 试样处理
5.1.1 固体试样：称取1.0g左右的样品（或根据试样含总皂苷量定），置于100mL容量瓶中，加水约80mL，超声30min，放冷，再用水定容至100mL，摇匀，放置，滤过，精密吸取续滤液25mL，进行萃取。
5.1.2 液体试样：含乙醇的补酒类保健食品，精密吸取10mL试样置水浴上挥尽乙醇，用水转移至分液漏斗中，并加水至约25mL，进行萃取。
5.1.3 非乙醇类的液体试样：精密吸取10mL试样（或根据试样含总皂苷量定）至分液漏斗中，加水至约25mL，进行萃取。
5.2 萃取：将已处理好的试样（见5.1）置于分液漏斗中，加入水饱和正丁醇振摇萃取3次，每次20mL，分取正丁醇液（必要时可离心），合并正丁醇液用氨试液洗涤3次，每次20mL，分取正丁醇液蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至25mL量瓶中（液体样品则转移至10mL）量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
5.3 样品测定：精密吸取5.2 项下溶液1.0mL（或根据试样含总皂苷量定），置于10mL具塞比色管中，置水浴中挥干溶剂，精密加入0.2mL5%香草醛冰乙酸溶液，再精密加入0.8mL高氯酸，混匀，使残渣都溶解，60℃水浴中加热10min，取出，冰浴冷却后，精密加入冰乙酸5.0mL，摇匀后，立即于560nm波长处与标准管一起进行比色测定。
5.4 人参皂苷Re标准曲线的制备：精密吸取人参皂苷Re标准溶液（3.7）0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL于10mL具塞比色管中，以下操作从5.3 “置水浴中挥干溶剂……”起，与试样同法测定吸光度。
5.5 空白测定：精密吸取5.2项下溶液1.0mL，置于10mL具塞比色管中，置水浴中挥干溶剂，精密加入0.20mL冰乙酸溶液，以下操作从5.3 “再精密加入0.8mL高氯酸……”起，与试样同法测定吸光度，做试样自身校正。
6 结果计算
C×V×100
X = ——————
V0×m×1000
式中：
X—试样中总皂苷量（以人参皂苷Re计），g/100g或g/100mL；
C—经试样自身校正后，由标准曲线算得被测液中总皂苷量，mg；
V—试样稀释体积，mL；
V0—参加显色试样体积，mL；
m—试样取样量，g或mL。
计算结果保留三位有效数字。
方法二
1 试剂
1.1 Amberlite-XAD-2 大孔树脂，购自Sigma化学公司。
1.2 正丁醇：分析纯
1.3 乙醇：分析纯
1.4 中性氧化铝：层析用，100-200目。
1.5 人参皂苷Re：购自中国食品药品检定研究院
1.6 香草醛溶液：称取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100mL。
1.7 高氯酸：分析纯
1.8 冰乙酸：分析纯
1.9人参皂苷Re标准溶液：精确称取人参皂苷Re标准品0.020g， 用甲醇溶解并定容至10.0mL，即每毫升含人参皂苷Re2.0mg。
2 仪器
2.1 比色计
2.2 层析柱
3 分析步骤
3.1试样处理
3.1.1 固体试样：称取1.000g左右的试样（根据试样含人参量定） ，置于100mL容量瓶中，加少量水，超声30min，再用水定容至100mL，摇匀，放置，吸取上清液1.0mL进行柱层析。
3.1.2 液体试样：含乙醇的补酒类保健食品，吸取1.0mL试样放水浴挥干，用水浴溶解残渣，用此液进行柱层析。非乙醇类的液体试样，吸取 1.0mL 试样（假如浓度高或颜色深，需稀释一定体积后再取1.0mL）进行柱层析。
3.2柱层析：用10mL注射器作层析管，内装3cmAmberlite-XAD-2大孔树脂，上加1cm中性氧化铝。先用25mL70%乙醇洗柱，弃去洗脱液，再用25mL水洗柱，弃去洗脱液，精确加入1.0mL已处理好的试样溶液（见3.1） ，用25mL水洗柱，弃去洗脱液，用25mL70%乙醇洗脱人参皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，置于60℃水浴挥干。以此作显色用。
3.3 显色：在上述已挥干的蒸发皿中准确加入 0.2mL5%香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使残渣都溶解， 再加0.8mL高氯酸， 混匀后移入5mL带塞刻度离心管中， 60℃水浴上加热10min，取出，冰浴冷却后，准确加入冰乙酸5.0mL，摇匀后，以1cm比色池于560nm波长处与标准管一起进行比色测定。
3.4 标准管：吸取人参皂苷 Re 标准溶液（2.0mg/mL）100µl，置于蒸发皿中，放在水浴挥干（低于60℃），或热风吹干（勿使过热） ，以下操作从“3.2 柱层析…”起，与试样相同。测定吸光度值。
4 结果计算
A1 V 100 1
X = ———×C×——×————×———
A2 m 1000 1000
式中：
X—试样中总皂苷含量（以人参皂苷Re计） ，g/100g；
A1—被测液的吸光度值；
A2—标准液的吸光度值；
C—标准管人参皂苷Re的量，µg；
V—试样稀释体积，mL；
m—试样质量，g。
计算结果保留三位有效数字。
十五、保健食品中总黄酮的测定
1 范围
本方法适用于以含黄酮类成分为主要原料的保健食品中总黄酮含量的测定。
本方法的检测限（LOD）为50ng；定量限（LOQ）200ng。
本方法的最佳线性范围（以芦丁计）：9.9～59.2μg/mL
2 原理：试样经预处理除杂后，以甲醇或60%乙醇溶液提取黄酮类成分。试样中的黄酮类成分可被亚硝酸钠还原，与硝酸铝生成络合物，在氢氧化钠溶液碱性条件下开环，生成 2-羟基查耳酮而使溶液显特征的橙红色，采用分光光法在510nm波长处测定吸光度，以芦丁为对照品，采用标准曲线法计算样品中总黄酮的含量。
3 试剂
除另有说明，实验中所用试剂均为分析纯；水为蒸馏水或去离子水。
3.1 5％亚硝酸钠溶液：称取5g亚硝酸钠，加水溶解成100mL。
3.2 10％硝酸铝溶液：称取硝酸铝10g，加水溶解成100mL。
3.3 氢氧化钠试液：取氢氧化钠4.3g，加水溶解成100mL。
3.4 石油醚（60～90℃）
3.5 乙醇
3.6 甲醇
3.7 芦丁对照品溶液： 取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，制成浓度为0.2mg/mL的对照品溶液。
4 仪器
4.1 紫外/可见分光光度计
4.2 超声波提取器
4.3 离心机
4.4 分析天平：万分之一及十万分之一
5 分析步骤
5.1 试样处理（试样取样量、供试液取样体积可根据试样中总黄酮的含量适当调整，以保证测定的吸收度值在0.2～0.7范围内）
5.1.1 固体试样：精密称取试样粉末0.4g（M），置索氏提取器中，加石油醚（60～90℃）加热回流提取至提取液无色，弃去石油醚液，样渣挥去石油醚，转移至具塞锥形瓶中，精密加甲醇25mL（V1），密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷至室温，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液作为供试品溶液。
5.1.2 液体试样：精密吸取供试品2mL（M），至25mL（V1）量瓶中，加60%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
5.2 芦丁对照品标准曲线制备：精密吸取芦丁对照品溶液（3.7项）0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0mL，分别置25mL（V3）量瓶中，加水至6mL，加入5%亚硝酸钠溶液1mL，摇匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液1mL，摇匀放置6min，加氢氧化钠试液10mL，摇匀，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以0.0mL对照品溶液制得的溶剂为空白，在波长510nm处分别测定吸收度值。以吸光度为纵坐标(A)，对照品浓度为横坐标（mg/mL），绘制标准曲线。
5.3 样品测定：精密吸取“5.1”项下供试溶液2mL（V2），至25mL量瓶中，照“5.2” 自“加水至6mL”起，在510nm波长处测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含总黄酮的浓度(C)，计算样品中总黄酮的含量（X）。
6 结果计算
C×V1×V3×100
X = ————————
V2×M×1000
式中：
X—试样中总黄酮百分含量，以芦丁(C27H30O16)计， g/100g（mL）；
C—标准曲线上读出供试品溶液中总黄酮的浓度，mg/mL；
V1—试样定容体积，mL；
V2—吸取供试液体积，mL；
V3—显色定容体积，mL；
M—试样取样量，g(mL)。
计算保留三位有效数字。
十六、部分功效成分/标志性成分检测方法国家标准
| 序号 | 功效成分/标志性成分 | 标准号 |
| 1 | α-亚麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸、二十二碳六烯酸 | GB 28404 |
| 2 | 前花青素 | GB/T 22244 |
| 3 | 异嗪皮啶 | GB/T 22245 |
| 4 | 泛酸钙 | GB/T 22246 |
| 5 | 淫羊藿苷 | GB/T 22247 |
| 6 | 甘草酸 | GB/T 22248 |
| 7 | 番茄红素 | GB/T 22249 |
| 8 | 绿原酸 | GB/T 22250 |
| 9 | 葛根素 | GB/T 22251 |
| 10 | 辅酶Q10 | GB/T 22252 |
| 11 | 大豆异黄酮 | GB/T 23788 |
| 12 | 褪黑素 | GB/T 5009.170 |
| 13 | 超氧化物歧化酶(SOD) | GB/T 5009.171 |
| 13 | 脱氢表雄甾酮 | GB/T 5009.193 |
| 14 | 免疫球蛋白IgG | GB/T 5009.194 |
| 15 | 吡啶甲酸铬 | GB/T 5009.195 |
| 16 | 肌醇 | GB/T 5009.196 |
| 17 | 盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺、咖啡因 | GB/T 5009.197 |
| 18 | 维生素B12 | GB/T 5009.217 |
十七、常用卫生指标检测方法
| 序号 | 卫生指标 | 常用检测方法 | 序号 | 卫生指标 | 常用检测方法 |
| 1 | 铅 | GB 5009.12 | 10 | 黄曲霉毒素B1 | GB/T 5009.22 |
| 2 | 砷 | GB/T 5009.11 | 11 | 展青霉素 | GB/T 5009.185 |
| 3 | 汞 | GB/T 5009.17 | 12 | 桔青霉素 | GB/T 5009.222 |
| 4 | 镉 | GB/T 5009.15 | 13 | 水分 | GB 5009.3 |
| 5 | 六六六 | GB/T 5009.19 | 14 | 灰分 | GB 5009.4 |
| 6 | 滴滴涕 | GB/T 5009.19 | 15 | 崩解时限 | 《中华人民共和国药典》 |
| 7 | 酸价 | GB/T 5009.37或GB/T 5009.56 | 16 | 溶散时限 | 《中华人民共和国药典》 |
| 8 | 过氧化值 | GB/T 5009.37或GB/T 5009.56 | 17 | pH值 | 《中华人民共和国药典》 |
| 9 | 黄曲霉毒素M1 | GB 5413.37或GB 5009.24 | 18 | 可溶性固形物 | GB/T 12143 |
